Articles

En metode til inducerbar genoverekspression og nedregulering i nye modelarter ved hjælp af Pogostick

ikke-traditionelle modelarter har brug for nye værktøjer til funktionel test af gener, både konserverede og slægtsspecifikke gener. Disse værktøjer skal muliggøre udforskning af genfunktion, enten via nedslag af endogene gener eller via overekspression og ektopisk ekspression af transgener. Vi konstruerede en ny vektor kaldet Pogostick, der kan bruges til at overekspressere eller nedregulere gener i organismer, der er modtagelige for kimlinjetransformation af piggyBac-transponerbart element. Vektoren bruger i øjeblikket varmechokpromotoren Hsp70 fra Drosophila melanogaster til at drive transgenekspression og vil som sådan have øjeblikkelig anvendelighed på organismer, der korrekt kan fortolke denne promotorsekvens. Her introducerer vi hovedfunktionerne i Pogostick, og hvordan kandidatgener kan indsættes i vektoren til brug i enten overekspression eller nedreguleringseksperimenter. Derudover tester vi også Pogostick i to insektarter, D. melanogaster og den nye model butterfly Bicyclus anynana. Vi overekspresserer det fluorescerende protein DsRed under larve-og puppestadierne i D. melanogaster udvikling, og nedregulerer DsRed i en linje, der konstitutivt udtrykker dette gen i øjnene. Vi tester derefter overekspression af Ultrabitoraks i B. anynana, og opnå sekvenser flankerer Pogostick genomiske indsættelser. Denne nye vektor giver nye modelarter mulighed for at komme ind på området funktionel genetik med få forhindringer.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.