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Un método para la sobreexpresión inducible de genes y la regulación descendente en especies modelo emergentes utilizando Pogostick

Las especies modelo no tradicionales necesitan nuevas herramientas para la prueba funcional de genes, tanto conservados como genes específicos de linaje. Estas herramientas deberían permitir la exploración de la función génica, ya sea a través de la destrucción de genes endógenos o a través de la sobreexpresión y la expresión ectópica de transgenes. Construimos un nuevo vector llamado Pogostick que se puede usar para sobreexprimir o reducir la regulación de genes en organismos susceptibles de transformación de la línea germinal por el elemento transponible piggyBac. El vector utiliza actualmente el promotor de choque térmico Hsp70 de Drosophila melanogaster para impulsar la expresión de transgénicos y, como tal, tendrá aplicabilidad inmediata a organismos que puedan interpretar correctamente esta secuencia promotora. Aquí presentamos las principales características de Pogostick y cómo se pueden insertar genes candidatos en el vector para su uso en experimentos de sobreexpresión o de regulación descendente. Además, también probamos Pogostick en dos especies de insectos, D. melanogaster y el modelo emergente butterfly Bicyclus anynana. Hemos sobre-expresan la proteína fluorescente DsRed durante la etapa larval y pupal de D. melanogaster desarrollo, y regular DsRed en una línea que expresan constitutivamente este gen en los ojos. A continuación, probamos la sobreexpresión de Ultrabithorax (Ubx) en B. anynana y obtenemos secuencias que flanquean las inserciones genómicas de Pogostick. Este nuevo vector permitirá que las especies modelo emergentes entren en el campo de la genética funcional con pocos obstáculos.

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