Articles

az indukálható gén túlexpresszió és lefelé szabályozás módszere a feltörekvő modellfajokban a Pogostick

a nem hagyományos modellfajoknak új eszközökre van szükségük a gének funkcionális teszteléséhez, mind a konzervált, mind a származásspecifikus gének. Ezeknek az eszközöknek lehetővé kell tenniük a génfunkció feltárását, akár az endogén gének leütése, akár a transzgének túlzott expressziója és méhen kívüli expressziója révén. Létrehoztunk egy új vektort, a Pogostick – ot, amely a piggyBac transzponálható elem által csíravonal-transzformációra alkalmas organizmusok génjeinek túlzott expresszálására vagy lefelé történő szabályozására használható. A vektor jelenleg a Drosophila melanogaster Hsp70 hősokk-promóterét használja a transzgén expressziójának elősegítésére, és mint ilyen, azonnal alkalmazható lesz olyan szervezetekre, amelyek helyesen értelmezhetik ezt a promotor szekvenciát. Itt bemutatjuk a Pogostick főbb jellemzőit, valamint azt, hogy a jelölt gének hogyan illeszthetők be a vektorba a túlexpressziós vagy lefelé irányuló szabályozási kísérletekhez. Ezen kívül két rovarfajnál is teszteljük a Pogostick-ot, a D. melanogasternél és a feltörekvő butterfly Bicyclus anynana modellnél. Túlexpresszáljuk a dsred fluoreszcens fehérjét a D. melanogaster fejlődésének lárva-és pupula stádiumában, és lefelé szabályozzuk a dsred-et egy olyan vonalban, amely konstitutívan kifejezi ezt a gént a szemében. Ezután teszteljük az Ultrabithorax (Ubx) túlzott expresszióját B. anynana-ban, és megkapjuk a Pogostick genomiális inszerciókat kísérő szekvenciákat. Ez az új vektor lehetővé teszi a feltörekvő modellfajok számára, hogy kevés akadályokkal lépjenek be a funkcionális genetika területére.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.