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FIXATION

BOT/MICRO/ZOO 5364

PREPARATION OF BIOLOGICAL SPECIMENS

FIXATION

Fixation of tissues is the most crucial step in thepreparation of tissue for observation in the transmission electron microscope. Fixation consists of two steps: 정상적인 생활 기능의 중단조직(살해)및 조직 구조의 안정화(보존). 고정의 목표는 구조를 충실히 보존하는 것입니다.살아있는 상태에 비해 가능합니다. 고정에 대해 기억하는 가장 중요한 세 가지 매개 변수는 다음과 같습니다.(1)살인과 고정 사이의 시간을 최소로 유지하십시오. (2)정보를 잃거나 조직을 파괴하지 않고 조직의 크기를 가능한 한 작게 유지하십시오. 큰 견본이 고쳐야 하는 경우에,1 밀리미터 미만 치수를 지키십시오,또는 정착액이 관통할 수 있다 그래야 분리될 수 있는 견본의 다른 닉 지역. 고정제의 효과적인 침투오스뮴에 대해 약 0.5 밀리미터입니다. (3)날카로운 도구를 사용하고 시편의 조작을 최소한으로 유지하여 총 조직 변형을 최소로 유지하십시오.모든 노력은 조직이 정착 될 때까지 생리 학적 매체에서 켑트 모이 스트 있는지 확인해야한다. 정착액에서 해부 할 수 있습니다.시편의 조작에 시간이 걸리는 경우 사용하십시오. 견본의 이상적인 크기. 이하(실제 크기).시편이 뜨면 물속에 잠겨야 합니다. 일부 경우에,이것은 고정 전에 시편을 습윤제에 간단히 담그거나 정착액에 습윤제를 첨가함으로써 이루어질 수 있다. 고착제가 고착제에 첨가되면 시편을 가능한 한 빨리 신선한 고착제로 옮기십시오. 갇힌 공기는 종종 원인이되기 때문에고정제에 떠있는 조직,공기는 때때로 부분 진공에 의해 제거 될 수 있습니다. 그러나,이것은 때때로 견본에 손상하고 있습니다. 가장 부드러운 접근은 단순히 정착액 표면 아래에 킴위프 플러그를 꽂아 정착액 표면 아래에 시편을 가두는 것입니다.시편이 고정되면,동일한 바이알을 사용하여준비. 각 변경 전에 바이알의 내용물을 간단히 디캔트(또는 피펫)하십시오. 일부사람들은 이 과정을 가속화하기 위해 흡인기를 사용하는 것을 선호합니다. 흡인기에서 손실 된 조직은 회복 할 수 없기 때문에 초보자는 재료 취급 경험이 될 때까지 흡인기를 사용하지 않는 것이 좋습니다.고정제는 신선한 것을 사용하는 것이 가장 좋습니다. 모든 고정제가 적어도 약간 광활성이고 모든 것이 환경에서의 산화에 민감하다고 가정하십시오. 이러한 이유로 정착액은 냉장고에 보관하거나냉동고 사용 직전에 실온으로 따뜻하게합니다. 상업적으로 준비되는솔루션은 질소 가스로 포장됩니다.글루 타르 알데히드는 일반적으로 맑고 병약 한 달콤한 냄새가 있습니다. (그러나 그것은 또한 증기로 효과적인 고착제이기 때문에 냄새를 맡기 위해 길을 벗어나지 마십시오.)글루 타르 알데히드는 밝은 황색을 띠는 글루 타르 산으로 분해 될 수 있습니다. 글루 타르 알데히드 고정은 방에서 일어날 수 있습니다.온도 또는 냉장고에서 2 시간(극도로 작은 경우),필요한 경우 6 시간(표준)이상. 어떤 사람들은 몇 주에서 몇 년 동안 머티리얼 조지아 개최,이 물질을 저하하는 경우,저하는 분명하지 않을 수 있습니다. (지주 솔루션으로 조지아의 사용은 마지막 리조트로 간주되어야한다.테트록사이드오스뮴은 밀짚색 결정으로,물과의 혼합시 비슷한 색의 용액이 생성됩니다. 그것은 단지 연기 후드에 사용되어야합니다. 오스뮴은 매우 비싸므로 각 샘플을 사용해야합니다.고정 중에 1-2 밀리리터의 용액. 그것은 실내 온도에 높게 불안정하 그것의 준비에서 이용된 모든 유리 그릇은 그것의 고장을 일으키는 원인이 될 유기 화합물을 제거하기 위하여 사용하기 위하여 산 세척된 우선권 이어야 합니다. 빛,열 또는 유기 물질의 존재 하에서 오스뮴테트록사이드는 이산화 오스뮴으로 변환될 것이다. 사용 된 오스뮴 및 흑색 오스뮴 용액은 흄 후드의 특수 폐기물 용기에 버려야합니다. 오스뮴 증기는 점막을 고정시키는 데 매우 효과적이며 실험실에서 위험 요소로 간주되어야합니다. 모든 오스뮴 고정은 더 이상 최대 2 시간 동안 추위에서 수행되어야합니다.탈수는 화학적으로 물으로부터 제거되는 화학 물질입니다.이 화학 물질에서 물은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 화학 물질에서 물은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 화학 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 화학 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 화학 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 물질은 화학 물질에서 제거되는 화학 물질입니다.이 사람들. 일반적인 탈수 유체는 에탄올과 아세톤입니다. 탈수의 잠재적 문제는 시편의 수축,혈장 분해 및 시편에서 용해성 성분의 제거입니다. 탈수는 반드시 수행되어야합니다.알코올 및 아세톤 용해성 화합물의 과도한 추출을 방지하기 위해 비교적 빠르게 진행되지만 혈장 분해를 방지하기에 충분히 느립니다.시편성분의 추출은 제어하기가 어렵다. 저 분자량 탄수화물은 특히 취약합니다.탄수화물 고정을 따르는 경우 일반적으로 가교 결합이 잘되지 않습니다. 단백질은 1 차 고정 동안 글루 타르 알데히드에 의해 가교되는 경향이 있으며 2 차 고정 동안 오스뮴 테트록사이드에 의한 지질. 탄수화물본질적으로 고정되지 않았습니다. 추출 문제와 관련이있는 것은주름. 두 문제 모두 낮은 농도에서 가장 심각합니다.탈수 시리즈. 일반적으로 빠른 탈수는 이러한 이유로 가장 좋습니다.70%의 알코올로 인해 조직이 더 이상 수축되지 않지만경화되기 시작합니다. 사실,높은 탈수 기간 연장알코올 농도는 조직을 매우 부서지기 쉽게 만들 수 있습니다. 정지 지점이 필요한 경우 대부분의 조직 학자들은 70%~100%알코올을 좋은 장소로 선택합니다.저녁 동안 멈추십시오.플라스머리해의 증거가 있다면,아마도 추가 탈수 단계(및/또는 그 이상의 변화)가 필요할 수 있다. 세포 막때로는 짧은 고정 기간 후에 약간의 삼투 활성을 유지합니다. 글루 타르 알데히드에서 더 긴 고정 기간은 삼투 감도를 감소시킬 수 있습니다. (멤브레인은 본질적으로 글루 타르 알데히드에서 48 시간 혼합 후 삼투압 변화에 민감하지 않습니다.)가난한 고정은 다음과 같은 문제를 일으킬 것입니다.탈수.냉장고 온도에서의 탈수는 처리 속도를 약간 늦추고 조직에 약간의 강성을 부여하는 경향이 있습니다. 또한 플라스 몰리 스를 약간 줄일 수 있습니다. 식물은 가난한 탈수에 가장 민감하기 때문에 냉장고탈수는 이러한 조직에 선호됩니다.솔루션을 변경할 때 시편이 마르지 않는지 확인합니다. 따라서 대부분의 작업자는 바이알의 바닥을 건조시키지 않습니다.변화 사이에,그러나 표본을 건조하게 유지하기 위해 약간의 액체를 남겨 둡니다. 상대 볼륨의 기초에서,이 나머지 솔루션은 중요하지 않습니다.알코올 용액을 혼합하려면 100%를 사용하는 것이 엄청나게 비싸기 때문에 95%알코올이 사용됩니다. 95%알코올을 사용하여탈수 유체는 계산기의 도움으로도 혼란 스러울 수 있습니다. 따라서 조직 학자들은 이러한 계산을 위해 지름길을 개발했습니다: 필요한 알코올의 양은 마치 100%를 사용하는 것처럼 계산됩니다(예:약 100 밀리리터의 70%알코올을 만들기 위해 졸업 된 실린더에 70 밀리리터를 추가합니다). 그런 다음 솔루션의 최종 볼륨이 5%감소합니다. (이 예에서는 물 25 밀리리터를 첨가하여 100 밀리리터가 아닌 70%알코올을 95 밀리리터로 만듭니다). 이것은 73.68 밀리리터의 95%알코올을 첨가하는 것과 마찬가지로 정확하며,70%용액의 100 밀리리터를 만드는 데 필요한 것입니다.2014 년 11 월 15 일(토)~2014 년 12 월 15 일(일)~2014 년 12 월 15 일(일)~2014 년 12 월 15 일(일)~2014 년 12 월 15 일(일)~2014 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)~2015 년 12 월 15 일(일)유체 또는플라스틱 수지를 사용한 전이 용매. 에폰 812 및 스퍼 레신의 경우,1/3 수지,2/3 수지 및 100%수지의 변화가 연속적으로 사용된다. 이 단계에서 표본에 대한 손상이 적기 때문에 침투 단계가 적습니다. 침투의 목표는 단순히 수지가 시편에 완전히 침투하는 것입니다.수지 및 용매의 용액은 사용 전에 즉시 제조되고 시료 바이알에 첨가된다. 폐기물 수지 솔루션은 폐기됩니다.흄 후드의 특수 용기에. 수지는 사용 사이 냉장고에 보관 될 수있다;그러나,그들은 물 차가운 수지에 응축되기 때문에 용기를 열기 전에 철저하게 따뜻하게 허용해야합니다.느린 회전을 사용하면 조직 블록에 수지가 침투하는 데 도움이됩니다. 침투 품질은 후에 만 판단 할 수 있습니다.결혼식. 일반적으로 약간 더 긴 침투 기간이 더 낫습니다.가난한 침투.2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 12 월 15 일(월)~2015 년 조직은액체 플라스틱 및 그 후속 중합. (1)젤라틴 캡슐 또는 특수 플라스틱 빔캡슐과 같은 작은 캡슐;(2)플랫 임베딩 몰드; (3)납작한 요리. 각각의 장점과 단점의 그것의 자신의 세트가 있습니다. 임베딩은단면의 방향을 결정하는 중요한 단계. 빔과 젤라틴캡슐은 표본에 극성이 없을 때,또는 이들 표본이 중력에 의해 방향을 잡을 때 이상적입니다. 미립자 샘플의 경우 가파른 벽과 좁은 팁이있는 특수 빔캡슐을 사용할 수 있습니다. 평평한 임베딩 몰드는 시편이 액체 플라스틱의 특정 위치를 향해야 할 때 선호됩니다. 이를 통해 정확한 교차 및 세로 단면을 준비하고 시편을 정렬하는 데 도움이됩니다. 평평한 접시는 시편이 크거나,시편의 방향이 비실용적 일 때 또는 단면 샘플을 선택하기 위해 대량의 재료를 스캔 할 때 유용합니다. 그런 다음 원하는 시편을 포함하는 소형 플라스틱 칩을 블록에서 톱질하고 절편을 위해 다웰 또는 주조 플라스틱 조각에 접착해야합니다.

Identification 의 블록은 쉽게 달성 andabsolutely 필요합니다. 연필이나 타자기를 사용하여 관련 데이터를 작성하십시오.작은 종이 또는 메모 카드 스톡을 삽입하기 전에 캡슐 또는 곰팡이에 삽입하십시오. 캡슐을 사용하면 다음 방향이 유용합니다.

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