Articles

a method for inducible gene over-expression and down-regulation in emerging model species using Pogostick

nietradycyjne gatunki modelowe potrzebują nowych narzędzi do testowania funkcjonalnego genów, zarówno konserwowanych, jak i genów specyficznych dla linii. Narzędzia te powinny umożliwiać badanie funkcji genów, albo poprzez knock-downs endogennych genów lub poprzez nadmierną ekspresję i ektopową ekspresję transgenów. Skonstruowaliśmy nowy wektor o nazwie Pogostick, który może być użyty do nadmiernej ekspresji lub obniżonej regulacji genów w organizmach podatnych na transformację linii zarodkowej przez element transponowalny piggyBac. Wektor obecnie wykorzystuje promotor szoku cieplnego Hsp70 z Drosophila melanogaster do kierowania ekspresją transgenu i jako taki będzie miał natychmiastowe zastosowanie do organizmów, które mogą poprawnie zinterpretować tę sekwencję promotorową. Tutaj przedstawiamy główne cechy Pogosticka i sposób wstawiania genów kandydujących do wektora do użycia w eksperymentach nadekspresji lub regulacji w dół. Ponadto badamy Pogostick u dwóch gatunków owadów, D. melanogaster i Wschodzącego modelu motyla Bicyclus anynana. Nadmiernie ekspresujemy fluorescencyjne białko dsred podczas larwalnych i poczwarkowych stadiów rozwoju D. melanogaster i regulujemy dsred w linii konstytutywnie wyrażającej ten gen w oczach. Następnie testujemy nadekspresję Ultrabithoraxu (Ubx) u B. anynana i otrzymujemy sekwencje flankujące wstawki genomowe Pogostick. Ten nowy wektor pozwoli wyłaniającym się gatunkom modelowym wejść na dziedzinę genetyki funkcjonalnej z kilkoma przeszkodami.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.