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Um método de inflamação induzida por gene sobre-expressão e down-regulation no modelo emergente de espécies usando Pogostick

não-tradicionais espécie de modelo precisa de novas ferramentas para o teste funcional de genes, ambos conservados e linhagem de genes específicos. Estas ferramentas devem permitir a exploração da função genética, quer através de “knock-downs” de genes endógenos, quer através de “over-expression” e “ectopic expression” de transgénicos. Nós construímos um novo vetor chamado Pogostick que pode ser usado para sobre-expressar ou para baixo-regular genes em organismos amenizáveis à transformação de linha germinal pelo elemento transposível piggyBac. O vector utiliza actualmente o promotor de choque térmico Hsp70 da Drosophila melanogaster para conduzir a expressão de transgeno e, como tal, terá aplicabilidade imediata a organismos que possam interpretar correctamente esta sequência Promotora. Aqui introduzimos as principais características do Pogostick e como os genes candidatos podem ser inseridos no vetor para uso em experimentos de sobre-expressão ou DOWN-regulation. Além disso, nós também testamos Pogostick em duas espécies de insetos, D. melanogaster e o modelo emergente Bicyclus anynana. Nós expressamos excessivamente a proteína fluorescente DsRed durante as fases larval e pupal do desenvolvimento de D. melanogaster, e abaixo-regular DsRed em uma linha constitutivamente expressando este gene nos olhos. Em seguida, testamos a expressão excessiva de Ultrabithorax (Ubx) em B. anynana, e obtemos sequências flanqueando as inserções genômicas Pogostick. Este novo vetor permitirá que espécies de modelos emergentes entrem no campo da genética funcional com poucos obstáculos.

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