Articles

En metod för inducerbar genöveruttryck och nedreglering i framväxande modellarter med Pogostick

icke-traditionella modellarter behöver nya verktyg för funktionell testning av gener, både konserverade och släktspecifika gener. Dessa verktyg bör möjliggöra utforskning av genfunktion, antingen via knock-downs av endogena gener eller via överuttryck och ektopiskt uttryck av transgener. Vi konstruerade en ny vektor som heter Pogostick som kan användas för att överuttrycka eller nedreglera gener i organismer som är mottagliga för könslinjetransformation av piggyBac-transposerbart element. Vektorn använder för närvarande värmechockpromotorn Hsp70 från Drosophila melanogaster för att driva transgenuttryck och som sådan kommer att ha omedelbar tillämplighet på organismer som korrekt kan tolka denna promotorsekvens. Här presenterar vi huvuddragen i Pogostick och hur kandidatgener kan sättas in i vektorn för användning i antingen överuttryck eller nedregleringsexperiment. Dessutom testar vi också Pogostick i två insektsarter, D. melanogaster och den framväxande modellen butterfly Bicyclus anynana. Vi överuttrycker det fluorescerande proteinet DsRed under larv-och puppstadiet av D. melanogaster-utveckling och nedreglerar DsRed i en linje som konstitutivt uttrycker denna gen i ögonen. Vi testar sedan överuttrycket av Ultrabithorax (Ubx) I B. anynana och erhåller sekvenser som flankerar Pogostick-genominsatserna. Denna nya Vektor gör det möjligt för nya modellarter att komma in i området funktionell genetik med få hinder.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.