Articles

SERPINA1 mRNA som behandling för Alfa-1 antitrypsinbrist

Abstrakt

alfa-1-antitrypsin (AAT) – brist är en genetisk störning som producerar inaktiv/defekt AAT på grund av mutationer i serpina1-genen som kodar för AAT. Denna sjukdom är förknippad med minskad aktivitet av AAT i lungorna och avsättning av överdrivet defekt aat-protein i levern. För närvarande finns det ingen specifik behandling för leversjukdom i samband med AAT-brist. Aat lungsjukdom behandlas ofta med en av flera serumproteinersättningsprodukter; långtidsstudier av effektiviteten av serpina1-ersättningsterapi är emellertid inte tillgängliga, och det minskar inte leverskador vid AAT-brist. mRNA-terapi kan potentiellt rikta sig mot både lever och lungor hos patienter med AAT-brist. Aat-patientfibroblaster och AAT-patientfibroblast-härledda hepatocyter transfekterades med SERPINA1-kodande mRNA och cellodlingsmedier testades för SerpinA1-uttryck. Våra data visar ökat SerpinA1-protein i odlingsmedier från behandlade aat-patientfibroblaster och AAT-patientfibroblast-härledda hepatocyter. In vivo-studier på möss av vildtyp visar SERPINA1-mRNA-biodistribution i lever och lungor, liksom serpina1-proteinuttryck i dessa två målorgan som påverkas kritiskt vid AAT-brist. Sammantaget tyder våra data på att SerpinA1 mRNA-terapi har potential att gynna patienter som lider av AAT-brist.

1. Introduktion

alfa-1-antitrypsinbrist (AATD) är en förödande sjukdom med brist på adekvata terapier. Nuvarande terapier skyddar endast lungorna och i avancerade fall kräver frekventa intravenösa injektioner av plasma-härledd aat-protein. Patienter med AATD är predisponerade för obstruktiv lungsjukdom och leversjukdom (t .ex. cirros och hepatocellulärt karcinom hos barn och vuxna). Cirka 1-5% av patienterna med diagnostiserad kronisk obstruktiv lungsjukdom (kol) uppskattas ha alfa-1-antitrypsinbrist . Även om det är extremt sällsynt har emfysem hos barn med AATD rapporterats och förekomsten av leversjukdom ökar med åldern . Allvarliga symtom uppträder senare i livet, särskilt hos rökare. Leversymptom på AATD ses sent i livet och kräver ofta levertransplantation. AATD är en ärftlig sjukdom orsakad av mutationer i serpina1-genen . Serpina1-genen har två alleler betecknade som m-alleler (normala patienter har en MM-genotyp). Den vanligaste allelen som resulterar i svår AAT-brist kallas Z (E342K) . Det har rapporterats att 95% av allvarliga aatd-patienter har en genotyp av ZZ och har endast 10-20% av SerpinA1-serumnivåerna . I fall av ZZ-mutation kan serpina1-proteinet inte vikas ordentligt och kommer inte att utsöndras av hepatocyter; därför orsakas AATD inte av en oförmåga att göra protein utan en oförmåga att utsöndra funktionellt protein. Ackumuleringen av ZZ SerpinA1 i hepatocyter resulterar i allvarlig leverskada . Homozygot PIZZ är ganska vanligt och förekommer i 1:2500-3000 födda i Nordamerika och Europa.

alfa-1-antitrypsin (aat), även känd som SERPINA1 (serinproteashämmare, grupp A, medlem 1), är ett utsöndrat protein som huvudsakligen produceras av hepatocyter och i mindre utsträckning av mononukleära fagocyter, neutrofiler och luftvägs – / tarmepitelceller . SerpinA1 är ett cirkulerande glykoprotein som också är vattenlösligt och vävnadsdiffusibelt . Serpina1s primära roll är serinproteasreglering och huvudplatsen för denna åtgärd är i lungorna. Där binder och inaktiverar SerpinA1 neutrofil elastas och skyddar därmed alveolära vävnader från proteolytisk nedbrytning under inflammatoriska svar . SerpinA1 är det vanligaste cirkulerande antiproteaset och normala plasmakoncentrationer av SerpinA1 når vanligtvis 1-2g/L .

AATD kännetecknas av polymerisation av felveckade serpina1-proteiner i grov endoplasmatisk retikulum av hepatocyter som minskar koncentrationen och aktiviteten av SerpinA1 i blod och vävnader . För patienter med svår brist är SerpinA1-serumnivåerna under 50 mg/dL medan normala nivåer är 200 mg/dL. Med låga nivåer av cirkulerande SerpinA1 är lungorna inte skyddade mot neutrofil elastas, ett enzym som förstör alveoler och orsakar lungsjukdom. Därför är de vanligaste kliniska komplikationerna av AATD lungemfysem och leversjukdom .

hittills är endast aat-förstärkningsterapi tillgänglig för behandling av AATD. Aat-förstärkningsterapi utvecklades 1987 och är för närvarande endast godkänd för kommersiell användning hos utvalda patienter med svårt aatd-relaterat lungemfysem . Aat-förstärkning hjälper bara till att leverera SerpinA1 till lungorna där det kan hjälpa till att förhindra neutrofil elastasskador. Eftersom serumbrist inte är orsaken till leverskador finns det ingen specifik behandling för patienter som lider av leversjukdom i samband med AATD. Den enda behandlingen är stödjande vård för typiskt leversvikt och levertransplantation för patienter med dekompenserad cirros .

AATD är en monogenisk störning som gör det till ett idealiskt mål för mRNA-terapi. mRNA är en ny modalitet som är potentiellt tillämplig för ett brett spektrum av sjukdomar på grund av dess enorma flexibilitet över traditionella biologiska och enzymersättningsterapi. mRNA-baserade terapier använder värdcellens endogena maskiner för produktion och posttranslationell modifiering av målproteiner, vilket möjliggör utveckling av terapier för sjukdomar som inte tidigare är riktade. Vi genomförde in vitro-och in vivo-studier för att avgöra om vi kunde uttrycka exogent kodad SerpinA1 och rikta mRNA/proteinet till lämpligt organ.

mRNA-terapi kan potentiellt rikta sig mot både lever och lungor hos patienter med AAT-brist (i väntan på aktuella experiment). Våra data visade ökat SerpinA1-protein i cellodlingsmedier av behandlade aat-patientfibroblaster, såväl som i cellodlingsmedier av AAT-patientfibroblast-härledda primära hepatocyter. Dessutom observerades både SERPINA1 mRNA och serpina1-protein hos WT-djur som fick SERPINA1 mRNA via intravenös injektion lokaliseras i både lever och lungor. Sammantaget tyder våra data på att mRNA-medierat uttryck av serpina1-protein i lungan kan hämma neutrofil elastas, medan det kan främja MM-isoformuttryck i levern och ge flera fördelar för AAT-patienter.

2. Material och metoder

2.1. Aatd-Patientfibroblaster

Cellodlingsförhållanden. Följande patientfibroblaster erhölls från Coriell Institute for Medical Research, Cell Repository (Camden, NJ): GM11423 och GM12445 från aatd-patientlever och GM02522 från aatd-patienthud och den normala kontrollfibroblastlinjen ND34769 från huden. Celler odlades i Örns minsta väsentliga Medium med Earles salter och icke-essentiella aminosyror (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) kompletterat med 15% fetalt bovint serum och inkuberades vid 37 kcal C i 5% CO2.

Transfektionsförhållanden. Patientfibroblaster transfekterades med 2.5UG av varje mRNA och 4 Aci l av mRNA-i lipid transfection reagens (MTI-GlobalStem, Gaithersburg, MD), i 3 oberoende experiment med 3 biologiska replikat per experiment. Varje mRNA späddes ut till 2,5 kg i OptiMEM (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) och liknande lämplig volym av mRNA-in späddes i OptiMEM per brunn och protokollet följdes enligt tillverkarens rekommendation. Utspädd mRNA blandades med utspädd lipid och fick inkubera i 15 minuter vid rumstemperatur innan de tillsattes till celler. Efter tillsats av mRNA-lipidblandning till patientfibroblaster återfördes celler till inkubator vid 37 c-c med 5% CO2. Efter 24 timmar tvättades cellerna försiktigt med PBS två gånger och lyserades i färsk RIPA-buffert (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO) med 1x proteashämmare (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO).

celllys och total proteinkvantifiering: patientens fibroblastcelllysat uppsamlades i 0, 5 mL rör (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) och centrifugerades vid 18000 x g vid 4 kg C för att avlägsna cellskräp. Efter centrifugering överfördes klar supernatant försiktigt till ett separat märkt rör och placerades på is. Total proteinkoncentration bestämdes med BCA-analyssats (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) i duplikat i 96-brunnsformat enligt tillverkarens protokoll.

Wes automatiserad kapillärelektrofores för SERPINA1-uttryck. De slutliga proverna på 5 occyl vardera vid 0,4 mg/mL proteinkoncentration bereddes enligt tillverkarens instruktioner för Protein Simple Wes. Lysater analyserades med användning av Protein Simple Wes storleksbaserat kapillärelektroforessystem (ProteinSimple Wes; ProteinSimple, San Jose, CA). De storleksseparerade proteinerna undersöktes med antikroppar specifika för SERPINA1 vid 1:125 utspädning (Novus NBP1-90309, Novus Biologics, Littleton, CO) och hushållerskan Thioredoxin vid 1: 1000 (CST 2429, Cell Signaling Technologies Inc., Danvers, MA), visualiseras med hjälp av märkta kanin sekundära antikroppar och kvantifieras med hjälp av tillverkarens programvara. För varje körfält normaliserades området under kurvan (AUC) för SERPINA1 till AUC för Tioredoxinkontrollen.

2.2. Alfa – 1-Antitrypsinbristande hepatocyter

Cellodlingsförhållanden. Aatd Patient-härledda hepatocyter genererades från aatd fibroblaster av DefiniGen (Cambridge UK) med användning av ett proprietärt differentieringsprotokoll. Celler odlades i DTM-media och DRM-media (DefiniGen, Cambridge UK) och pläterades vid 500 000 celler per brunn i en 24-brunnsplatta. Celler odlades i hypoxiska förhållanden vid 37 C i 5% CO2 och 5% O2 med media som byts varannan dag i 10 dagar före transfektion baserat på proprietär tillverkares protokoll (DefiniGen, Cambridge UK). Celler odlades under hypoxiska förhållanden enligt tillverkarens instruktioner, vilket möjliggjorde celltillväxt, medan icke-hypoxiska förhållanden minskade celltillväxten.

Transfektionsförhållanden och proteinuttryck av ELISA. Aatd-hepatocyter transfekterades med 4UL Lipofektamin 2000 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA) per 2.5UG mRNA, i 3 oberoende experiment med 3 biologiska replikat per experiment. Celler inkuberades sedan i 24, 48 och 72 timmar innan cellodlingsmediet avlägsnades och analyserades för serpina1-proteinkoncentration med användning av en ELISA från Abcam (Cambridge, MA) och efter tillverkarens protokoll.

2.3. In vivo-studier

alla experiment, djurhus, hantering och experimentella procedurer/protokoll godkändes och utfördes i enlighet med Alexion Pharmaceuticals Inc. IACUC riktlinjer och förordningar. C57BL / 6 hanmöss (6 veckor gamla) användes i denna studie. Möss hölls i en temperaturkontrollerad miljö med en 12-h/12-h ljus-mörk cykel, med en standarddiet och vatten ad libitum.

formulering av mRNA i Lipidnanopartiklar och in vivo dosering. mRNA-konstruktioner formulerades med användning av en självmonterande joniserbar lipid nanopartikel (LNP) innehållande SERPINA1 mRNA. En GFP-kodning av mRNA användes som en mRNA-laddad fordonskontroll och PBS användes som en negativ kontroll i detta experiment. LNP framställdes genom snabb blandning av mRNA i acetatbuffert vid pH 4.0 med en lipidblandning, Hepato9 mRNA kit (Precision NanoSystems), suspenderad i etanol vid ett lipid-till-läkemedelsförhållande på ~11 (wt/wt). Djur injicerades med en enda intravenös dos på 1,5 mg/kg formulerat mRNA genom svansvenen. Djur offrades 24 timmar efter injektion och vävnader fixades och bearbetades för in situ hybridisering (ISH) och immunhistokemi (IHC).

provsamling och FFPE-provberedning. Djur nekropsierades och den vänstra laterala loben placerades platt i vävnadskassetter (Fisher Scientific). Kassetter placerades sedan i en behållare fylld med 10% Neutral buffrad Formalin, NBF (Sigma) fixativ lösning vid minst 1:20 förhållande av vävnadsvolym kontra fixativ lösning. Prover fick fixa i minst 24 timmar men inte mer än 48 timmar vid rumstemperatur. Efter vävnadsfixering placerades kassetten i en behållare fylld med PBS i högst 3 dagar. Efter PBS-tvätt bearbetades levervävnader och inbäddades i paraffinblock.

2.4. Immunohistokemi och in Situ-Hybridiseringsprocedurer

immunohistokemi för SERPINA1 utfördes på formalinfixerade paraffininbäddade, 5 occurm vävnadssektioner med användning av en antikropp mot SERPINA1 (Atlas, HPA001292 vid 1:100). Immunfärgning utfördes på Leica BOND RX-plattformen (Leica Biosystems, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL) enligt standardprotokoll med lämpliga positiva kontroller. Antigenhämtning, standard på Leica BOND RX-plattformen, utnyttjade Leica ER1, EDTA-Tris, pH 8.0-lösningen. Slides dehydratiserades i en graderad etanolserie, rensades i xylen och monterades med användning av Cytoseal. Bilder avbildades med hjälp av VS120-systemet vid 40x förstoring (Olympus).

för mRNA-visualisering gjordes in situ hybridisering (ISH). Anpassad RNA in situ hybridiseringssond (Affymetrix, Santa Clara, CA) var utformad för att detektera SERPINA1 mRNA. Automatiserad RNA ISH-analys utfördes med användning av ViewRNA ez-L Detektionssats (Affymetrix, Santa Clara, CA) och Leica BOND RX-plattformen (Leica Biosystems, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL) användes. Formalinfixerade, paraffininbäddade (FFPE) vävnader bereddes vid 5 um tjocklek på glasskivor och sattes på Leica BOND RX. ViewRNA ez-L-analysen kördes enligt manufactures-protokollet, men i korthet avslöjades RNA med en 10-min inkubation vid 95 C i Bond epitop Retrieval Solution 1 (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL), följt av 20-min inkubation med Proteinas K från Bond Enzyme Pretreatment Kit vid 1:1000 utspädning (Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL). Hybridisering utfördes med serpina1 1: 40 sondutspädning följt av FastRed detektion. För att säkerställa RNA-integritet och analysprocedur hybridiserades ytterligare sektioner med en sond för peptidylprolylisomeras B (PPIB), ett endogent hushållsprotein som användes som en positiv kontroll för ISH. För att kontrollera för icke-specifik färgning användes kontrollsond mot bakteriellt proteindihydrodipikolinatreduktas (dapB) som en negativ kontroll. Alla sonder var vid en 1: 40 utspädning. Slides lufttorkades, rensades i xylen och monterades med användning av Cytoseal. Bilder avbildades med hjälp av VS120-systemet vid 40x förstoring (Olympus).

3. Resultat

3.1. mRNA-härledd humant SerpinA1-uttryck i Celllysater och Cellmedier av Patientfibroblaster och Patientfibroblast-härledda primära hepatocyter

Human SERPINA1 mRNA från TriLink transfekterades till aatd-patientfibroblaster, erhållna från Coriell Institute. Signifikant ökning av humant SerpinA1-proteinuttryck observerades i celllysater(Figur 1 (A)) och cellodlingsmedier(Figur 1 (b)) vid transfektion av antingen vildtyp (WT) eller FLAGGMÄRKT (FT) SerpinA1.

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Figure 1
In vitro human SerpinA1 expression in cell lysates (a) and cell media (b) from AATD patient fibroblasts and normal skin fibroblasts. Vehicle control is GFP mRNA; WT-SERPINA1 is WT mRNA sequence; FT-SerpinA1 is flag-tagged mRNA sequence.

Human SERPINA1 mRNA-transfektion utfördes också i patientfibroblast-härledda primära hepatocyter erhållna från DefiniGen. Utsöndring av WT SerpinA1-protein i odlingsmediet ökades vid 24h jämfört med vehikeln endast GFP mRNA-kontroll. Vi observerade en konsekvent ökning av serpina1-proteinuttryck över tiden sett vid 48h och 72h efter transfektion (Figur 2).

Figure 2
In vitro human SerpinA1 expression in cell culture media obtained from patient fibroblast-derived hepatocytes (DefiniGen, Cambridge UK).

3.2. In Vivo Human SerpinA1 Expression in WT Mice

Human SerpinA1 protein expression was subsequently evaluated in WT C57bl/6 mice. Human SERPINA1 mRNA observerades i levern(Figur 3 (A)) som kan förväntas med tanke på att mRNA är inkapslad i en lipid nanopartikel som i allmänhet levererar en stor mängd av sin last till levern. En spännande upptäckt var att SERPINA1 mRNA också detekterades i lungorna hos möss (Figur 3(b)). SerpinA1-proteinuttryck detekterades med användning av en human specifik serpina1-antikropp. Serpina1-protein sågs i både lever (Figur 3(c)) och lungorna (Figur 3(d)). Det sinusformiga fördelningsmönstret för serpina1-proteinuttryck i levern indikerar att serpina1-protein troligen utsöndras i blodet av hepatocyter.

(b)

(c)(sträng)

div>

(d)(d)

(a)
(a)(b)
(b)(redet)
(d)
(d)
in vivo Human serpina1 mRNA biddistribution i lever(A) och lungorna(b) av WT mippa 24h efter i.v. avgiftades motsatt ish. Röda prickar i bilden representerar mRNA. Serpina1-protein visualiserades i lever (c) och lungor (d) av IHC.

4. Diskussion

AATD är en förödande sjukdom med behov av effektiva terapier för att gynna patienter. Nuvarande förstärkningsterapi är otillräcklig för att undvika långvarig skada på levern hos aatd-patienter. För närvarande bedriver många grupper nya metoder för att tillhandahålla välbehövliga terapier som genterapi. Till exempel har benmärgs-härledd stamcellstransplantation testats i aatd-Möss och visat viss räddning av hepatocytförsämring . Genersättningsstrategier testas också i kliniken , varvid en WT SERPINA1-gen sätts in i levern och uttrycker lämpligt SerpinA1-protein. Nuvarande metoder behöver fortfarande optimeras och AAV-medierad genleverans kan orsaka antikroppsmedierad minskning av proteinsekretion eller en immunologisk reaktion på viruskapsiden.

vi utvärderade effekten av övergående uttryck av SERPINA1 mRNA i muslever eftersom mRNA-leverans till lever är relativt enkel och etablerad via lipidnanopartiklar (LNP), och vi kan administrera LNP-inkapslat mRNA utan signifikanta immunreaktioner. Ursprungligen testade vi vår hypotes i aatd-patientfibroblaster och patientfibroblast-härledda primära hepatocyter. Våra data visar tydligt att vi kan koda SERPINA1 med mRNA och därefter uttrycka serpina1-protein från båda celltyperna. Vi visar också att serpina1-protein utsöndras från dessa celler och proteinnivåer kan mätas i supernatant/cellodlingsmediet. Detta innebär att det mRNA-kodade serpina1-proteinet viks och modifieras på lämpligt sätt i cellen för att möjliggöra utsöndring från ER och in i cellodlingsmedium som är en nyckelfunktion i denna mRNA-terapi. Med hjälp av mRNA-terapi kan vi använda kroppens egna celler som en fabrik för att syntetisera protein, posttranslationellt modifiera det och slutligen utsöndra det i blodflödet. Preliminär analys av cellodlingsmedium indikerar att den utsöndrade SerpinA1 är enzymatiskt aktiv i en neutrofil elastasinhiberingsanalys (data visas inte). Våra data i figurerna 1, 2 och 3 tyder på att nivåerna av serpina1-protein är signifikant högre än baslinjen eller negativa kontrollnivåer. Dessa nivåer bör vara tillräckliga för att minska neutrofil elastasaktiviteten i plasma och lungorna och därmed förhindra alveolär nedbrytning och emfysem, som är karakteristiska för AATD.

vi utvidgade våra studier för att avgöra om mRNA-kodad SERPINA1 kunde uttryckas in vivo. Våra studier visar att intravenöst injicerat humant SERPINA1 mRNA nådde både lever och lungor i WT-möss (figurerna 3(A) och 3(b)). Således kan lipid-inkapslad mRNA-terapi potentiellt rikta sig mot båda ställena för AATD (lever och lunga). Ännu viktigare, humant SerpinA1-protein producerades i både lever och lungor hos WT-möss (figurerna 3(c) och 3(d)). SerpinA1-proteinuttrycksmönstret i leverns sinusoider indikerar att proteiner utsöndras av hepatocyterna eller en annan levercellstyp, såsom stellatceller som normalt uttrycker SERPINA1. Våra data kan inte utesluta möjligheten att mRNA kommer in eller uttrycks av andra leverceller förutom hepatocyter, och detta kommer att behöva ytterligare arbete. Det är möjligt att humant SerpinA1-protein i lungorna kan komma från två källor: SERPINA1 mRNA som nådde lungorna via IV-injektion, liksom den utsöndrade humana serpina1 som produceras av humant SERPINA1 mRNA i levern. I båda fallen är potentialen för serpina1-proteinuttryck och lokalisering i lungorna och levern lovande eftersom det kan blockera neutrofil elastasmedierad skada i lungorna medan eventuellt minskande PIZZFORMER i levern. Den senare hypotesen är baserad på studier från Karadagi et al. varvid en ökning av serpina1-protein genom förstärkningsterapi visade en minskning av PIZZ-formen i aatd-patient PBMC. Detta ökar möjligheten att mRNA-kodat SerpinA1-protein, när det uttrycks i levern, kan minska leverproduktionen av PIZZ-formen och därefter hämma leverfibros. Hämning av leverfibros och ER-stress kan i slutändan minska/eliminera aatd-patientens behov av levertransplantation. Vår hypotes måste testas in vivo i en aatd-modell som visar leverfibros och progression till hepatocellulärt karcinom.

även om dessa är spännande data, vill vi påpeka att mRNA-terapier behöver förbättras för att potentiellt ge kronisk nytta för aatd-patienter. Nuvarande halveringstider för exogent levererat mRNA är vanligtvis 24-48h i vävnad, medan proteinhalveringstiderna varierar beroende på proteinet och dess nedbrytande mekanismer. Strategier för att öka halveringstiden för mRNA är för närvarande under utredning och tidiga data indikerar att vi kan öka varaktigheten av mRNA-stabilitet genom att modulera UTRs som flankerar det kodonoptimerade mRNA . Rationella proteintekniska strategier är också inriktade på att underlätta ökad proteinhalveringstid vilket resulterar i ökad enzymatisk aktivitet och i slutändan ett minskat behov av dosering av mRNA-behandlingen . Dessa nya förbättringar kan resultera i en mRNA-behandling som doseras sällan och upprätthåller tillräcklig enzymaktivitet, t.ex. SerpinA1-protein, för att ge klinisk förbättring. En annan aspekt som skulle förbättra mRNA-terapier är säkerheten vid LNP-leverans där vi kan dosera LNPs med några veckors mellanrum. Nuvarande LNP-teknik underlättar en dosering en gång i månaden men stöder inte en mer frekvent dosering om vi parar dosering med effekt. Som nämnts tidigare kan LNP-inkapslade mRNA-terapier redoseras, till skillnad från vissa AAV-genterapier, och dosen kan titreras för att ge maximal patientnytta.

5. Slutsats

våra studier presenterar potentialen för en ny terapeutisk modalitet, mRNA-terapi, varigenom ett saknat eller icke-funktionellt protein kan ersättas för att utföra normala funktioner. Våra resultat visar att lipid-inkapslat mRNA kan riktas mot lungan och levern som är de två primära platserna för sjukdom i AATD. Medan tidigare studier som utforskar mRNA-terapi för AATD har visat proteinuttryck vid 24h i a549-och HEK293-celler , visar våra studier serpina1-proteinuttryck i aatd-patientfibroblaster och patient-härledda hepatocyter som är relevanta cellinjer för sjukdomen. Dessutom utökar vi tidigare studier inom detta område genom att visa att lipidinkapslat mRNA kan leverera till muslever och lunga och producera SerpinA1-protein för att vara funktionellt relevant för patienter. Ytterligare forskning måste genomföras i en AATD-sjukdomsmodell och för att säkerställa säkerheten vid multipel dosering av mRNA hos gnagare och högre djur innan man överväger denna modalitet för humant bruk. Sammantaget höjer våra studier den intressanta möjligheten att mRNA-terapi som använder SERPINA1 mRNA kan vara till nytta för aatd-patienter.

datatillgänglighet

Alla data som stöder resultat som publiceras i den här artikeln presenteras i artikeln. Det finns inga andra data tillgängliga.

intressekonflikter

alla författare är anställda och aktieägare i Alexion Pharmaceuticals, Inc., ett företag som utvecklar terapier för sällsynta och ultrarare sjukdomar.

författarnas bidrag

Brendan Connolly utformade och genomförde cellodling, transfektioner och in vivo-provbehandling. Cleo Isaacs utformade och genomförde IHC. Lei Cheng utformade och genomförde ISH-experiment, manuskriptskrivning och in vivo-studier. Kirtika H. Asrani utförde västerländska blottar, immunanalyser och in vivo-provbehandling. Romesh R. Subramanian utformade experiment, granskade data och författat manuskript

bekräftelser

Alexion Pharmaceuticals, Inc., erkänns för finansiering.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.